作者：鄒倩、趙春杰、邱宏春 郭曉迪

摘要

目的  建立一種依匹哌唑原位凝膠植入劑的體外釋放方法，研究處方在體外的釋放行為和緩釋機(jī)制。
方法  以抗精神病依匹哌唑?yàn)槟Ｐ退幬铮苽湟跃廴樗?羥基乙酸共聚物（ ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ ｇｌｙ? ｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ，ＰＬＧＡ）／醋酸異丁酸蔗糖酯（ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ，ＳＡＩＢ）為基質(zhì)的原位凝膠植入劑。開(kāi)發(fā)體外釋放檢測(cè)方法，采用多種體外釋放裝置研究依匹哌唑原位凝膠植入劑的釋放差異， 考察體外釋放的影響因素。
結(jié)果  依匹哌唑在酯基封端ＰＬＧＡ／ＳＡＩＢ處方下顯示出低突釋和釋放緩慢的特征，體外釋放以擴(kuò)散為主，符合０級(jí)釋放模型。采用分層加樣的流通池法，藥物在１４ｄ可達(dá)到完全釋放，釋放率達(dá)（８５. ４ ± ２. ４）％ 。
結(jié)論  依匹哌唑原位凝膠植入劑適合采用流通池法進(jìn)行體外評(píng)價(jià)，建立的體外釋放方法操作簡(jiǎn)便、可靠。同時(shí)處方在體外表現(xiàn)出明顯的緩釋效果，且釋放穩(wěn)定。

關(guān) 鍵 詞

一、簡(jiǎn) 介
精神分裂癥和重度抑郁癥（ｍａｊｏｒ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ，ＭＤＤ）是常見(jiàn)的嚴(yán)重精神類疾病，全球患病率約為１％。依匹哌唑（ｂｒｅｘｐｉｐｒａｚｏｌｅ）是第二代抗精神分裂癥藥物，用于成人精神分裂癥與ＭＤＤ的輔助治療，主要作用機(jī)制是部分阻斷多巴胺Ｄ２受體和５?羥色胺受體（５?ＨＴ１Ａ），拮抗５?ＨＴ２Ａ和去腎上腺素能α１／２受體。ＦＤＡ于２０１５年７月批準(zhǔn)依匹哌唑片（商品名：Ｒｅｘｕｌｔｉ?）上市，每日口服一次。通常精神類疾病需要長(zhǎng)期治療，目前已上市的抗精神病長(zhǎng)效注射劑最長(zhǎng)可實(shí)現(xiàn)６個(gè)月注射一次，在臨床上受到了患者和醫(yī)生的廣泛青睞，依匹哌唑目前暫無(wú)長(zhǎng)效注射劑上市。國(guó)內(nèi)外針對(duì)依匹哌唑開(kāi)發(fā)的長(zhǎng)效制劑技術(shù)包括混懸液、原位相變凝膠注射劑 、磷脂原位凝膠和微球，開(kāi)發(fā)持續(xù)緩釋的依匹哌唑長(zhǎng)效制劑將具有廣闊的應(yīng)用和商業(yè)價(jià)值。原位凝膠植入劑（ｉｎ ｓｉｔｕ ｇｅｌ ｆｏｒｍｉｎｇ ｉｍｐｌａｎｔ，ＩＳＧＦＩ）是將可生物降解的載體材料溶解于具有生物相容性的溶劑中，并與藥物混合，形成溶液或混懸液的一種新型緩釋注射劑。在注入肌肉或皮下后，處方在注射部位發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成由藥物和可生物降解材料組成的固體植入體，持續(xù)釋放藥物可達(dá)數(shù)天或數(shù)月。其中原位沉淀系統(tǒng)（聚合物沉淀和蔗糖酯沉淀系統(tǒng)）由于其具有輔料少、處方工藝簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)而備受醫(yī)藥行業(yè)的青睞。本文作者擬制備依匹哌唑的原位沉淀系統(tǒng)制劑，在前期研究中發(fā)現(xiàn)醋酸異丁酸蔗糖酯（ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ， ＳＡＩＢ）／Ｎ?甲基吡咯烷酮（１?ｍｅｔｈｙｌ?２?ｐｙｒｒｏｌｉｄｉ? ｎｏｎｅ，ＮＭＰ）基質(zhì)處方在體外固化形成的貯庫(kù)膠 凝強(qiáng)度較弱，體內(nèi)和體外均表現(xiàn)出較高的突釋，突釋（２４ｈ）是原位凝膠制劑面臨的主要風(fēng)險(xiǎn)，短時(shí)間血藥濃度的升高，可能造成局部或全身的毒性反應(yīng)。而處方中加入適當(dāng)聚乳酸?羥基乙酸共聚物（ ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ，ＰＬＧＡ）后可有效降低體外突釋且ＳＡＩＢ與低分子量ＰＬＧＡ相容性良好，有研究報(bào)道，采用ＰＬＧＡ／ＳＡＩＢ作為基質(zhì)用于原位凝膠植入劑的開(kāi)發(fā)。
體外釋放方法是制劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)，可用于預(yù)測(cè)和評(píng)價(jià)產(chǎn)品在體內(nèi)釋放，減少體內(nèi)（人體和動(dòng)物）實(shí)驗(yàn)次數(shù)，大大降低藥物研發(fā)的成本。由于原位凝膠注射劑缺乏成熟的體內(nèi)體外相關(guān)性模型，體外釋放方法的開(kāi)發(fā)受限。主要存在的困難有：無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化方法指導(dǎo)；膠凝形成植入物的形狀差異；體外無(wú)法完全釋放（＞８０％ ）；釋放方法操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等。這些困難使得原位凝膠制劑的開(kāi)發(fā)和仿制藥研發(fā)面臨巨大挑戰(zhàn)。本文作者以依匹哌唑?yàn)槟Ｐ退幬铮苽洌校蹋牵粒樱粒桑聻檩d體材料的原位凝膠植入劑，首先采用多種非胃腸道制劑常用的體外釋放方法 （透析法、槳法、搖瓶法、流通池法），從方法可操作性和釋放差異來(lái)評(píng)估其適用性。其次，制備不同ＰＬＧＡ型號(hào)（Ｌ／Ｇ比，封端）、不同溶劑的處方，考察制劑的影響因素和釋放機(jī)制，為進(jìn)一步的體內(nèi)研究提供數(shù)據(jù)支持。

二、儀器與材料

ＸＳ１０５ＤＵ型電子分析天平（瑞士 Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏ? ｌｅｄｏ公司），Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０高效液相色譜儀（配有ＤＡＤ檢測(cè)器，美國(guó)Ａｇｉｌｅｎｔ公司），全自動(dòng)流通池法溶出度測(cè)試系統(tǒng)（推薦使用華溶儀器DS-7CP PLUS 流池法溶出系統(tǒng)），溶出自動(dòng)取樣系統(tǒng)（推薦使用華溶儀器DS-1406AT全自動(dòng)取樣溶出系統(tǒng)），Ｎａｎｏｐｕｒｅ純水儀（ 美 國(guó) Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司）。
依匹哌唑原料藥（含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)１００.２％ ，浙江華海藥業(yè)股份有限公司），Ｎ?甲基吡咯烷酮（１? ｍｅｔｈｙｌ?２?ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｎｅ，ＮＭＰ，上海阿拉丁試劑有限公司），ＰＬＧＡ（德國(guó)贏創(chuàng) ＥＶＯＮＩＫ 公司，５０∶ ５０羧基封端ＰＬＧＡ５０２Ｈ：分子量分布７～１７ｋＤａ；５０∶ ５０ 酯 基封端 ＰＬＧＡ５０２：分子量分布７～１７ｋＤａ；７５∶２５羧基封端ＰＬＧＡ７５２Ｈ：分子量分布４～１５ｋＤａ），乙酸異丁酸蔗糖酯（ｓｕｃｒｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ，ＳＡＩＢ，美國(guó)Ｅａｓｔｍａｎ公司），三醋酸甘油酯（ｔｒｉａｃｅｔｉｎ，ＴＡ，美國(guó)Ｊ. Ｔ Ｂａｋｅｒ 公司），苯甲酸芐酯（ｂｅｎｚｙｌ ｂｅｎｚｏａｔｅ，ＢＢ，上海阿拉丁試劑有限公司），苯甲醇（ｂｅｎｚｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ，ＢＡ，德國(guó) Ｍｅｒｃｋ 公司），十六烷基三甲基溴化銨（ ｃｅｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，ＣＴＡＢ，上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司），十二烷基磺酸鈉（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ，ＳＤＳ，美國(guó)Ｓｉｇｍａ 公司），聚乙二醇辛基苯基醚（ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ? １００，上海滬試實(shí)驗(yàn)室器材股份有限公司），氯化鎂（上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司），氯化鈉（上海滬試實(shí)驗(yàn)室器材股份有限公司），氯化鉀、氯化鈣、二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖、碳酸氫鈉（上海泰坦科技股份有限公司），硫酸鎂、磷酸、乙腈、甲醇（美國(guó)Ｓｉｇｍａ公司）。

三、方法與結(jié)果
3.1 處方制備
3.1.1 釋放方法篩選
制備質(zhì)量比為５０∶ ５０的ＳＡＩＢ?ＮＭＰ基質(zhì)，在振蕩儀上室溫振搖過(guò)夜，使其完全溶解，形成澄清透明均一的溶液。稱量上述溶液和質(zhì)量比１０％的ＰＬＧＡ５０２Ｈ于西林瓶中，磁力攪拌約３０ｍｉｎ使其完全溶解，再加入處方量的依匹哌唑原料藥（載藥量：１０ｍｇ·ｇ －１），攪拌至完全混勻，置于２～８ ℃?zhèn)溆谩?
3.1.2 處方釋放的影響因素考察
稱取處方量的ＳＡＩＢ，加入ＮＭＰ或ＤＭＳＯ作為溶劑，放置于振蕩器上室溫過(guò)夜振搖使其完全混勻，形成澄清透明均一的溶液。按表１，稱量ＳＡＩＢ?溶劑基質(zhì)、ＰＬＧＡ（不同封端和不同Ｌ／Ｇ比）和０、１０％ 、２０％ 釋放調(diào)節(jié)劑（三醋酸甘油酯和 苯甲酸芐酯）于西林瓶中，用磁力攪拌約３０ｍｉｎ使其完全溶解，再加入處方量的依匹哌唑原料藥（載藥量：１０ｍｇ·ｇ），攪拌至完全混勻，置于２～８ ℃?zhèn)溆谩?br/>

表1 原位凝膠植入劑處方

表2　吡羅昔康凝膠IVRT的CAA

3.2　體外釋放檢測(cè)方法的建立
3.2.1 色譜條件
色譜柱：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ（１００ｍｍ×４. ６ｍｍ，３. ５μｍ）柱，流動(dòng)相：ｐＨ６.８磷酸鹽緩沖液（２. ８ｇ磷酸氫二鈉至１Ｌ超純水，溶解混勻，用磷酸調(diào)節(jié)ｐＨ至６. ８，混勻，經(jīng)０. ４５μｍ微孔濾膜過(guò)濾）?乙腈（體積比４５∶５５），流速：１. ０ｍＬ·ｍｉｎ，柱溫：３５℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：２１５ｎｍ，進(jìn)樣體積：２０μＬ，運(yùn)行時(shí)間：６ｍｉｎ。
3.2.2 溶媒
稱量氯化鈉８ｇ、 氯化鉀４００ｍｇ、氯化鈣１４０ｍｇ、七水合硫酸鎂１００ｍｇ、六水合氯化鎂１００ｍｇ、二水合磷酸氫二鈉６０ｍｇ、磷酸二氫鉀６０ｍｇ、葡萄糖１ｇ、碳酸氫鈉３５０ｍｇ和十六烷基三 甲基溴化銨１ｇ于１Ｌ純化水中，攪拌至完全溶解。
3.2.3 對(duì)照品溶液
稱取適量依匹哌唑原料藥，置于５００ｍＬ量瓶中，用乙腈?水（體積比７５∶２５）超聲溶解，定容，制成６０μｇ·ｍＬ的依匹哌唑?qū)φ召A備液；移取適量對(duì)照品貯備液，用溶媒作為稀釋液，稀釋定容制成６μｇ·ｍＬ的對(duì)照品溶液。
3.2.4 方法學(xué)驗(yàn)證
空白溶媒、空白輔料（ＰＬＧＡ／ＳＡＩＢ／ＮＭＰ 混 合基質(zhì)）和樣品溶液色譜圖見(jiàn)圖１，在依匹哌唑（保留時(shí)間約４. ０ｍｉｎ）出峰處無(wú)明顯干擾，方法專屬性良好。以依匹哌唑峰面積（Ａ）為縱坐標(biāo)，樣品質(zhì)量濃度（ ρ，μｇ·ｍＬ）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性 回歸，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Ａ＝１９６. ６ρ＋２. ００１，ｒ＝１.０００，線性范圍為０. ３～１２μｇ·ｍＬ，線性關(guān)系良好。準(zhǔn)確度研究：０. ３、６、９μｇ·ｍＬ三個(gè)質(zhì)量濃度水平的測(cè)得濃度和理論濃度比值分別為１０１. ４％ 、１００.５％和１００.３％（ｎ＝３），ＲＳＤ為２.８％（ｎ＝９），表明準(zhǔn)確度良好，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果均符合接受標(biāo)準(zhǔn)。

圖1　空白溶媒（Ａ）、空白輔料溶液（Ｂ）和樣品溶液（Ｃ）的高效液相色譜圖

3.3 釋放介質(zhì)的選擇
參考上市產(chǎn)品Ｐｅｒｓｅｒｉｓ? ，Ｈａｎｋ′ｓ平衡鹽溶液可以模擬人體皮下環(huán)境間質(zhì)液的ｐＨ和離子組成。由于依匹哌唑原料藥在Ｈａｎｋ′ｓ平衡鹽溶液 中的飽和溶解度小于０.１μｇ·ｍＬ，為滿足漏槽條件，考察了加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為０. １％ 、０.２％、０. ５％和１. ０％的不同種類表面活性劑的飽和溶解度（３７ ℃ ），結(jié)果見(jiàn)表２，其中ＣＴＡＢ的增溶效果最明顯。當(dāng)介質(zhì)中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)０. １％ＣＴＡＢ（臨界膠束濃度：０.０３３％～０.０３６％，來(lái)自ＵＳＰ）時(shí)，可滿足漏槽條件，同時(shí)，ＣＴＡＢ具有一定的抑菌性，可防止長(zhǎng)期運(yùn)行而產(chǎn)生的微生物污染。最終選擇溶媒為Ｈａｎｋ′ｓ平衡鹽溶 液＋０. １％ＣＴＡＢ。另外，考察了依匹哌唑在３７ ℃條件下的溶液穩(wěn)定性，結(jié)果表明依匹哌唑原料藥在溶媒中２１ｄ內(nèi)穩(wěn)定，回收率均在９８. ０％～１０２.０％ ，滿足制劑長(zhǎng)期釋放要求。

 表2　３７ ℃下依匹哌唑在ｐＨ７. ４Ｈａｎｋ′ｓ平衡鹽＋不同表面活性劑中的飽和溶解度（ｎ＝３）

3.4  體外釋放方法考察
原位凝膠植入劑常用體外釋放方法有搖瓶法、透析法（正相、反相透析，綜合透析法）、槳法（ＵＳＰ２ 法）、流通池法（ＵＳＰ ４ 法）等。由于原位凝膠植入劑的釋放表面積的不同可能影響藥物的釋放，所以在前期研究中，采用綜合透析法（Ｄ? Ｔｕｂｅ ＴＭ Ｄｉａｌｙｚｅｒ Ｍｉｎｉ，截留分子量為１２～１４ ｋＤａ透析管＋籃法）進(jìn)行釋放研究，將處方加入透析管中，再將透析管放入籃法中，把處方釋放表面積控制在透析管膜上，結(jié)果發(fā)現(xiàn)處方釋放非常緩慢（２ｄ釋放不到１０％ ）且重復(fù)性差。推斷的原因是透析膜對(duì)藥物的擴(kuò)散有阻礙，釋放受到膜的限制；其次處方中含有ＳＡＩＢ，由于ＳＡＩＢ黏度較大，易黏附在透析膜上，阻擋管內(nèi)外的介質(zhì)交換，導(dǎo)致釋放延遲，所以不適宜采用透析法。
3.4.1 搖瓶法
用１ｍＬ帶２１Ｇ針頭注射器吸取０.１ｍＬ制劑處方，注入６０ｍＬ溶媒，轉(zhuǎn)速：７５ｒ·ｍｉｎ－１，搖床溫度：３７ ℃，于設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)取樣２ｍＬ，經(jīng)０. ４５μｍＰＶＤＦ過(guò)濾后進(jìn)行檢測(cè)。
3.4.3 槳法
用１ｍＬ帶２１Ｇ針頭注射器吸取０.１ｍＬ制劑處方，用注射器將處方從液面下打入９００ｍＬ溶出杯中。轉(zhuǎn)速：５０ｒ·ｍｉｎ，溫度：３７ ℃，于設(shè)定時(shí)間 點(diǎn)取樣２ｍＬ，經(jīng)１０μｍ在線過(guò)濾頭和０.４５μｍ ＰＶＤＦ濾膜過(guò)濾后測(cè)定，使用防揮發(fā)罩，注意溶媒揮發(fā)。
3.4.3 流通池法
閉環(huán)，流速：８ｍＬ·ｍｉｎ，溶媒溫度：３７℃，溶酶體積：９００ｍＬ，于設(shè)定時(shí)間點(diǎn)取樣２ｍＬ，經(jīng)２.７μｍ直徑玻璃纖維過(guò)濾膜（ＧＦ／Ｄ，Ｗｈａｔ? ｍａｎＴＭ ）和０.４５μｍＰＶＤＦ過(guò)濾。加樣方式Ａ：向２２.６ｍｍ制劑池底部加入１顆紅寶石球，用直徑１ｍｍ玻璃珠填充至樣品池底部錐形部分，加入８ｍＬ溶媒，在液面下用１ｍＬ注射器（２１Ｇ針頭）注入０.１ｍＬ樣品，鋪在玻璃珠上層，待膠凝１０ｍｉｎ后開(kāi)始運(yùn)行。加樣方式Ｂ（分層加樣?上下 加玻璃珠）：加樣方式與前面步驟一致，在膠凝１０ｍｉｎ后在原位制劑上方再加入約９ｇ玻璃珠后，運(yùn)行程序。
3.4.4 統(tǒng)計(jì)分析
每批處方至少制備三份，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積釋放率，為了對(duì)比同一時(shí)間點(diǎn)兩個(gè)值之間差異的顯著性，使用置信水平為９５％的ｔ檢驗(yàn)，Ｐ＜０.０５被認(rèn)為是具有顯著性差異。采用Ｇｒａｐｈ? Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ７軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
3.4.5 體外釋放方法比對(duì)
在ＳＡＩＢ?ＮＭＰ＝ ５０∶ ５０（質(zhì)量比）基質(zhì)中加入 質(zhì)量比為１０％ＰＬＧＡ５０２Ｈ，考察三種常用體外釋 放方法（搖瓶法、槳法和流通池法?加樣方式Ａ）的 釋放差異。結(jié)果見(jiàn)圖 ２。

圖2　不同釋放方法體外釋放曲線比對(duì)（ｘ ± ｓ，ｎ ＝ ３）

從圖可知，三種方法的釋放速度具有一定差異，槳法、流通池和搖瓶法７ｄ累積釋放率分別為（７３. ０１ ± ３. ７８）％ 、（６１. ７９ ± ８. ３４）％ 和（５０. ８６ ± ４. ４８）％ 。為研究處方的釋藥機(jī)制，對(duì)三種體外釋放結(jié)果使用Ｏｒｉｇｉｎ Ｐｒｏ ８.０軟件分別進(jìn)行體外釋放動(dòng)力學(xué)模型擬合，包括：０級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、１級(jí)動(dòng)力學(xué)方程、Ｈｉｇｕｃｈｉ方程，詳見(jiàn)表３。

表 ３ 不同釋放方法的體外釋放擬合方程結(jié)果

從擬合方程結(jié)果可以看出，搖瓶法結(jié)果符合１級(jí)釋放模型，槳法和流通池法符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程。Ｈｉｇｕｃｈｉ方程為骨架擴(kuò)散機(jī)制，是描述藥物從基質(zhì)釋放的常用數(shù)學(xué)模型。以ＰＬＧＡ／ＳＡＩＢ／ＮＭＰ基質(zhì)的處方加入介質(zhì)后，在發(fā)生相轉(zhuǎn)變過(guò)程中藥物隨溶劑ＮＭＰ擴(kuò)散到介質(zhì)中為突釋階段；１１３６沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)第４０卷然后ＰＬＧＡ遇水固化后形成被薄膜包圍的多孔結(jié)構(gòu)，當(dāng)制劑表面或表層的藥物釋放完成后，深層的藥物通過(guò)彎曲的孔道擴(kuò)散出來(lái)；最后藥物隨聚合物溶蝕而釋放，整個(gè)釋藥過(guò)程以擴(kuò)散為主。Ｈｉｇｕｃｈｉ方程更符合該處方的體外釋藥特性。另外，搖瓶法在取樣時(shí)發(fā)現(xiàn)凝膠制劑易受到破壞，導(dǎo)致制劑損失和結(jié)果重復(fù)性差。同時(shí)，原位凝膠植入劑釋放時(shí)間較長(zhǎng)（如１４、３０ｄ 等），槳法裝置下溶媒揮發(fā)，操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能導(dǎo)致釋放結(jié)果的不準(zhǔn)確且無(wú)法自動(dòng)化取樣的搖瓶法裝置，會(huì)增加工作量。因此，本文作者采用流通池法對(duì)處方釋放 影響因素的考察。
3. ５ 依匹哌唑原位凝膠植入劑體外釋放影響因素考察
3.5.1 不同ＰＬＧＡ類型對(duì)釋放的影響
不同封端基團(tuán)由于聚合物極性差異會(huì)表現(xiàn)出不同的釋放行為 ，考察加入不同封端的ＰＬＧＡ（ＰＬＧＡ５０２Ｈ 和 ＰＬＧＡ５０２）和不同Ｌ／Ｇ 比例ＰＬ? ＧＡ（７５∶２５，ＰＬＧＡ７５２Ｈ）處方的釋放差異（圖３）。

圖３ 不同ＰＬＧＡ類型對(duì)體外釋放的影響（流通池法?加 樣方式Ａ，ｘ ± ｓ，ｎ＝３）

根據(jù)圖３可以看出，不同ＰＬＧＡ型號(hào)?ＳＡＩＢ的混合基質(zhì)處方體外釋放差異較大。首先是突釋，ＰＬＧＡ７５２Ｈ處方１ｄ內(nèi)的體外突釋為（２８. ３ ± ４. ４）％ ， 與 ＰＬＧＡ５０２［（ ４. ４ ± １. ６ ）％ ］和ＰＬ? ＧＡ５０２Ｈ［（６. ５ ± １. ２ ）％ ］相比，具有明顯差異 （Ｐ＜０. ０５），而不同封端ＰＬＧＡ的處方突釋無(wú)明 顯差異。從第５天起，以羧基封端處方釋放明顯 快于酯基封端，１４ｄ釋放分別約（８０. ６ ± ４. ９）％和（３２. ７ ± ４. ８）％ 。ＰＬＧＡ ５０２以酯基封端，極性 較低，親水性弱，依匹哌唑?yàn)椋拢茫?ＩＩ類的親酯性 藥物，與聚合物的親和力較溶劑更強(qiáng)，體外釋放緩 慢，比羧基封端表現(xiàn)出更長(zhǎng)的緩釋效果。另外，通 過(guò)與０級(jí)、１級(jí)和Ｈｉｇｕｃｈｉ釋放模型方程的擬合，ＰＬＧＡ５０２Ｈ（ ｒ２ ＝ ０. ９９２１）和ＰＬＧＡ５０２（ ｒ ２＝０. ９７５４）的處方均表現(xiàn)出０級(jí)釋放特征。而在ＰＬＧＡ７５２Ｈ處方下，整體釋放速率較其他兩種更快，釋放擬合模型符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方 程（ｒ２ ＝ ０. ９７５３）。因此，優(yōu)先選擇酯基封端的ＰＬＧＡ５０２繼續(xù)進(jìn)行考察。
3.5.2不同溶劑和釋放調(diào)節(jié)劑對(duì)釋放的影響
溶劑移除原位制劑系統(tǒng)中常用的有機(jī)溶劑主要分為與水混溶和與水部分混溶兩種類型 。與水 互溶的溶劑容易形成均勻的凝膠貯庫(kù)，利于注射，并且在皮下組織幾分鐘快速進(jìn)行相轉(zhuǎn)變。而疏水性溶 劑會(huì)在數(shù)周或數(shù)月進(jìn)行相轉(zhuǎn)變，被稱為緩慢相轉(zhuǎn)變，對(duì)應(yīng)的制劑系統(tǒng)黏度較高，形成的貯庫(kù)是均勻致密 有限的小孔，突釋低 。本文作者選擇向ＰＬ? ＧＡ５０２／ＳＡＩＢ基質(zhì)中加入不同溶劑和釋放調(diào)節(jié)劑， 對(duì)比不同溶劑和混合溶劑的釋放差異（圖４）。

圖 ４ 不同溶劑對(duì)體外釋放的影響（ｘ ± ｓ，ｎ ＝ ３）

從圖４可以看出，ＰＬＧＡ５０２／ＳＡＩＢ基質(zhì)中加入ＮＭＰ或ＤＭＳＯ，整體釋放速率接近。采用ＤＭＳＯ作溶劑時(shí)，結(jié)果重復(fù)性較差，故優(yōu)選 ＮＭＰ為溶劑。向ＮＭＰ中加入不同含量的疏水性溶劑（ＴＡ 和 ＢＢ）的釋放曲線見(jiàn)圖５，結(jié)果見(jiàn)表４，處方中分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為１０％和２０％ＢＢ后，２４ｈ突釋率增長(zhǎng)至（２８. １ ± ４. ９）％ 和（２２. ４ ± ６. ３）％ ；加入１０％ＴＡ 后，突釋率增長(zhǎng)至（２１. １ ± ８. ５）％ 。２４ｈ突釋率和平均釋放率相比未添加疏水性溶劑具有顯著性差異（Ｐ＜０. ０５）。這種現(xiàn)象也有類似的報(bào)道，可能的原因是依匹哌唑原料藥在疏水 性 溶 劑ＢＢ（ ４. ６ ｍｇ · ｍＬ－１，２５ ℃ ）和ＴＡ（２. １ｍｇ·ｍＬ－１，２５ ℃）中的溶解度較低，依匹哌唑原料藥在處方中呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)，在注入介質(zhì)后，未被基 質(zhì)包裹的依匹哌唑原料藥會(huì)快速隨溶劑擴(kuò)散出去，第９期鄒倩等：依匹哌唑原位凝膠植入劑的體外釋放研究 １１３７導(dǎo)致突釋的增加。所以從降低體外突釋的目標(biāo)來(lái)說(shuō)，處方選擇不加入釋放調(diào)節(jié)劑 ＢＢ和ＴＡ。

圖 ５ ＮＭＰ／ 不同添加劑對(duì)釋放的影響 （ｘ ± ｓ，ｎ ＝ ３）

表 ４ 不同添加劑對(duì)釋放的影響

3.5.3 釋放機(jī)制研究
由于體內(nèi)環(huán)境和植入物形成微觀結(jié)構(gòu)變化機(jī)制的復(fù)雜性，體外往往很難去模擬制劑在體內(nèi)的 釋放過(guò)程。其中關(guān)鍵影響因素之一就是制劑在注 射部位形成植入物的尺寸和形狀。Ｐａｔｅｌ等使用掃描電子顯微鏡觀察到ＰＬＧＡ／ＮＭＰ基質(zhì)在體外環(huán)境下，注射７ｄ 后植入物呈現(xiàn)均勻的球形；在皮下注射后，移除時(shí)呈現(xiàn)平坦的圓盤(pán)狀。這是由 于藥物注射后受到皮下周圍組織的壓縮，成型后的植入物產(chǎn)生形變，產(chǎn)生更大的表面積。另外，與體內(nèi)形成的植入物相比，在體外直接注射形成的植入物會(huì)經(jīng)歷更多的膨脹，但在體內(nèi)周圍組織的 間隙壓力阻礙了植入物的擴(kuò)張，迫使藥物和溶劑機(jī)械性釋放。所以原位凝膠制劑在體內(nèi)通常會(huì)展 現(xiàn)出比體外更高的釋放。為更好地表征處方的釋放過(guò)程，降低體內(nèi)風(fēng) 險(xiǎn)，闡明釋放機(jī)制，本研究通過(guò)分層加樣的方式（Ｂ）模擬制劑體內(nèi)的擠壓狀態(tài)進(jìn)行體外評(píng)價(jià)，加樣裝置（Ａ和Ｂ）見(jiàn)圖 ６。在下方加入玻璃珠可以 使溶媒流動(dòng)形成層流，在上方加入玻璃珠可以將 樣品固定，同時(shí)形成擠壓，模擬制劑在體內(nèi)的擠壓狀態(tài)。已有類似改良加樣方式的研究，Ｆｏｒｒｅｓｔ 等采用分層加樣的方式對(duì)納米混懸液制劑進(jìn) 行體外釋放，可得到明顯不同的三相釋放結(jié)果。對(duì)ＰＬＧＡ５０２／ＮＭＰ／ＳＡＩＢ 處方采用常用加樣方式（Ａ）與分層加樣方式（Ｂ）分別進(jìn)行研究。

圖 ６ 原位凝膠植入劑加入樣品池的示意圖

從圖７可看出，采用分層加樣方式（Ｂ）后，突釋為（６.２ ± １.８）％，相比直接加樣方式的突釋率（４.６ ± ０.９）％ ，無(wú)顯著差異。但從第５天開(kāi)始，體外釋放明顯加快，１４ｄ可達(dá)（８５. ４±２. ４）％ ，達(dá) 到完全釋放（ ＞ ８０％ ）。隨著介質(zhì)的進(jìn)入和溶劑 的擴(kuò)散，聚合物載體逐漸膨脹，而玻璃珠的擠壓使 得基質(zhì)內(nèi)的藥物隨溶劑擴(kuò)散出來(lái)，導(dǎo)致藥物釋放 速率加快，釋放過(guò)程以擴(kuò)散為主。另外，對(duì)釋放結(jié)果分別用０級(jí)、１級(jí)和Ｈｉｇｕｃｈｉ方程進(jìn)行擬合，擬 合結(jié)果見(jiàn)表５。處方在不同釋放方法條件下均表 現(xiàn)出０級(jí)釋放的特征。這是由于ＰＬＧＡ５０２疏水性較強(qiáng)，可減慢介質(zhì)進(jìn)入基質(zhì)的時(shí)間，使得降解主要發(fā)生在制劑表面，將藥物的釋放限制在可降解區(qū)域，以近似恒定速率進(jìn)行釋放。

圖 ７ 原位凝膠植入劑在不同加樣方式的流通池法下的 體外釋放曲線（ｘ ± ｓ，ｎ ＝ ３）

表 ５ ＰＬＧＡ／ＳＡＩＢ／ＮＭＰ基質(zhì)處方體外釋放模型擬合

四、討  論
原位凝膠植入劑是一種新型長(zhǎng)效注射劑，目前沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)化的藥典體外釋放方法。本文參考上市產(chǎn)品、文獻(xiàn)和藥典方法，考察了多種原位凝膠注 射劑常用的體外釋放方法。結(jié)果顯示，流通池可以更好地反映依匹哌唑原位凝膠植入劑的體外釋放行為并且具有良好的區(qū)分力。ＵＳＰ４法是目前認(rèn)為最適用于緩釋非胃腸道劑型的裝置，閉環(huán)可模擬體內(nèi)流體動(dòng)力學(xué)變化且避免長(zhǎng)時(shí)間釋放過(guò)程溶媒的揮發(fā)，已有多個(gè)微球制劑采用流通池法并建立了良好的體內(nèi)體外相關(guān)性 。

其次，本文作者以降低依匹哌唑原位凝膠植入劑的體外突釋和釋放速率為目標(biāo)，對(duì)制劑處方的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)（ＰＬＧＡ 封端、Ｌ／Ｇ比例、溶劑、釋放調(diào)節(jié)劑）進(jìn)行了考察。在以ＮＭＰ為溶劑時(shí)，酯基封端相較羧基封端的ＰＬＧＡ和ＰＬＧＡ７５２Ｈ結(jié)果相比，依匹哌唑原料藥在ＰＬＧＡ５０２中的親和力更強(qiáng)，表現(xiàn)出更好的緩釋效果。在處方中加入疏水性溶劑苯甲酸芐酯和三醋酸甘油酯后，藥物１ｄ內(nèi)的體外突釋反而增加。由于原位凝膠植入劑在體內(nèi)的釋放過(guò)程十分復(fù)雜，釋放可能會(huì)受到皮下環(huán)境、宿主與植入物之間的相互作用還有藥物吸收的影響。本文作者則采用注射器吸取處方打入釋放介質(zhì)中成型，模擬處方經(jīng)注射后在注射部位膠凝過(guò)程。優(yōu)化加樣方式，在成型后的植入物上方加入玻璃珠，模擬皮下擠壓狀態(tài)。改良加樣方式后的流通池法可以使制劑在１４ｄ達(dá)到完全釋放，有效縮短運(yùn)行時(shí)間，不改變釋放機(jī)制。本裝置可作為評(píng)估原位凝膠植入劑在體內(nèi)風(fēng)險(xiǎn)的方式，為進(jìn)一步的體內(nèi)研究奠定基礎(chǔ)和提供數(shù)據(jù)支持。